[ONLINE] [자연과학] 분자미생물학 실험 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법) …
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작성일 24-03-31 02:40
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주로 minipreparation(mini prep.)이라고 부르는 이 방법은 plasmid…(skip)
1. 세포벽을 깬다. 우리가 얻고자 하는 plasmid DNA는 상층액에 존재하게 된다된다.
introduction
유전자 재조합은 DNA를 목적에 따라 적절히 자르고 붙여서 유전물질을 원하는 형태로 개조시키는 과정이다. 즉, 제한효소를 사용하여 목적 DNA와 plasmid DNA를 잘라 이 두 분자를 ligase를 사용하여 연결시키는 것이다.
2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것(너무 잘게 조각나게 되면, 그로 인해 plasmid DNA도 깨져버리게 된다된다. 그러나 크기가 작은 supercolied plasmid DNA는 잘 denature되지 않는다.)을 방지하면서 용액에 DNA를 노출시킨다. 이렇게 엉긴 chromosomal DNA를 원심분리로 제거한다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.
실험과제/생물의학
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설명
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title
mini preparation
object
DNA의 크기차이에 의해 분리하는 방법인 alkaline lysis method를 이용하여 정제된 DNA의 양을 불린다. 이것이 지방 ingredient을 녹이기 때문일것이다
) 가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 된다된다. 이 때 원하는 DNA분자가 만들어졌는지를 조사하기 위하여 형질전환체 중 여러 colony를 후보로서 택하여 형질전환체 내에 들어있는 plasmid DNA를 조사하여야한다. 이 때 바로 alkaline 용액에 노출된 DNA는 denature(다풀리는 것)된다된다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이 때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다.
[자연과학] 분자미생물학 실험 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법) 실험
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[자연과학] 분자미생물학 실험 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법) 실험
다. 이렇게 reaction(반응)시킨 DNA용액을 대장균에 형질전환 시킨다.